Sản xuất kháng thể IgY từ lòng đỏ trứng gà đặc hiệu H. pylori
Phạm Hùng Vân, Phạm Thái Bình, Trương Thị Diệu Hồng, Lê Thúy Quyên, Lưu Ly Bích Ngân, Trần thị Kiều,
Lê Thị Kiều Thảo, Đặng Hồng Phúc, Phạm Thiên Hương, Phạm Trường Sơn, Nguyễn Hữu Huân, Simon M. Cutting
Công ty Nam Khoa, Đại Học Phan Châu Trinh, Đại Học Y Dược TP. HCM,  Công ty Bioland, Bệnh viện Pháp Việt, Đại Học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch, Đại Học Sydney, Đại Học Bang Arizona, Royal Holloway Đại Học Luân Đôn, Công ty Sporogen.
Tóm tắt
Đặt vấn đề: Tại Việt Nam, tình hình vi khuẩn H. pylori đề kháng các kháng sinh đặc trị và thông dụng như clarithromycin, metronidazole, levofloxacin ngày càng gia tăng và hậu quả thất bại điều trị ngày càng ghi nhận càng nhiều. Chính vì vậy giải pháp sử dụng IgY đặc hiệu H. pylori hiện đang được các bác sĩ quan tâm.
Mục tiêu: Sản xuất được kháng thể IgY đặc hiệu H. pylori từ lòng đỏ trứng đẻ từ gà mái được gây miễn dịch bằng đường chích vi khuẩn H. pylori.
Vật liệu và phương pháp: Kháng nguyên là H. pylori được trộn với tá chất Freund rồi chích gây miễn dịch cho gà. Trứng được lấy từ 1 tháng sau mũi chích đầu tiên. Tách lòng đỏ và trộn đều vào 8 thể tích nước để tách lấy IgY tan trong phase nước, sau đó tủa IgY bằng 40% ammonium sulfate bảo hòa hay 70% NaCl bảo hòa. Thu tủa rồi thẩm tích loại bỏ muối. Điện di qua SDS-PAGE để kiểm tra độ tinh khiết của IgY. Định lượng IgY bằng OD260. Định lượng hiệu giá kháng thể IgY đặc hiệu bằng ELISA phủ vi khuẩn H. pylori. Xác định hoạt tính ngưng tụ H. pylori bằng phản ứng tụ trên lame kính, và xác định hoạt tính ức chế urease của kháng thể IgY đặc hiệu H. pylori bằng phương pháp sử dụng CLO test.
Kết quả và bàn luận: Kết quả nghiên cứu cho thấy phương pháp tách IgY từ lòng đỏ trứng bằng nước cho hiệu quả tách được 100% IgY qua kết quả định lượng protein lên đến 395mg/trứng. Phương pháp tủa với muối ammonium sulfate là thu được IgY gần như tinh khiết vì đã loại gần hết các protein khác. Phương pháp tủa bằng NaCl cũng hiệu quả nhưng kém hơn. Kết quả ELISA cho thấy sau 1 tháng kể từ mũi chích đầu tiên gây miễn dịch, hiệu giá IgY đặc hiệu đã đạt 1/12,800 và sau 3 tháng đã đạt hiệu giá tối đa là 1/25,600.

Kết quả  trên kính và kết quả trên CLO test cũng cho thấy IgY đặc hiệu H. pylori thu được từ lòng đỏ trứng là có hoạt tính gây kết tụ H. pylori cũng như ức chế enzyme urease và các hiệu quả này chắc chắn sẽ phát huy tác dụng nếu sản phẩm được sử dụng in-vivo.

Kết quả định lượng IgY có trong lòng đỏ trứng: Các dịch tách chiết IgY bằng phương pháp tủa với ammonium sulfate và phương pháp muối ăn được định lượng bằng các đo mật độ quang (OD) ở bước sóng 280nm và tính toán theo đường chuẩn dựng bởi OD các nồng độ BSA 20mg/ml, 10mg/ml, 5mg/ml, 2mg/ml và 1mg/ml. Kết quả đo OD được trình bày trong bảng 1 sau đây
Bảng 1: Giá trị OD280 của các nồng độ BSA và các tách chiết IgY (được pha loãng 1/5 trong PBS)

Kết luận: Do tình hình đề kháng các kháng sinh của H. pylori tại Việt Nam ngày càng cao và càng gia tăng, nhu cầu sử dụng IgY đặc hiệu H. pylori bằng đường uống sẽ rất cao. Do các hạn chế về công nghệ nên chưa có một công ty sản xuất trong nước nào sản xuất được sản phẩm này. Chính vì vậy nghiên cứu với các kết quả thu nhận được chính là một mở đầu cho sản phẩm mới áp dụng trong hổ trợ kháng sinh để điều trị viêm loét dạ dày do H. pylori tại Việt Nam.

Từ khóa: Sản xuất IgY, IgY đặc hiệu H. pylori
Tác giả liên lạc: TS. BS. Phạm Hùng Vân, email: phhvan.nkbiotek@gmail.com, ĐT: 0903698920